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各類(lèi)細胞產(chǎn)品是我們做實(shí)驗研究的基礎。一支小小的細胞，從ATCC細胞庫，不遠萬(wàn)里來(lái)到中國，應該如何正確進(jìn)行復蘇、培養呢？請隨小編為您逐一講解。

一、溫馨小提醒

凍存的ATCC細胞株和雜交瘤細胞株在運送過(guò)程中使用干冰保持低溫。收到凍存細胞后，可以立即解凍復蘇，去除二甲基亞砜（DMSO）后進(jìn)行細胞培養。如果不立即復蘇培養細胞，必須將細胞凍存管放置于液氮罐存儲。請不要將細胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低，達不到-130℃，細胞活力會(huì )迅速下降。

二、產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

 ATCC每個(gè)細胞株都有一份產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（product sheet），其中包含細胞株的信息和詳細的操作指南。此外，ATCC可以提供具體生產(chǎn)批次的檢測報告（COA），其中包含批次的特定信息，如每只凍存管中細胞的數量，微生物污染的檢測結果等。細胞株的所有詳細介紹可以在 ATCC 網(wǎng)站找到，產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)和COA可以從ATCC網(wǎng)站下載。

三、操作注意事項

     1.ATCC推薦在操作凍存的ATCC細胞株時(shí)使用手套，工作服和防護面具以避免任何事故發(fā)生。

      2.檢查包裝，查看是否有任何破裂或滲漏。凍存的ATCC細胞株應處于固體狀。

      3.將凍存的ATCC細胞株從有干冰的包裝中取出，立即復蘇培養，或迅速轉移放置在液氮罐存儲。

四、細胞復蘇步驟

1.先準備好細胞培養皿或細胞培養瓶，及產(chǎn)品說(shuō)明推薦的相應細胞培養基。并在37℃水浴中預先溫熱細胞培養基。(請參閱:*注1)

2.小心取出裝有細胞的凍存管，保持管蓋擰緊，將凍存管蓋以下的部分置于37℃水浴中并輕微的晃動(dòng)以幫助解凍。解凍過(guò)程應該盡快，大約短于2分鐘或待最后一塊小冰晶體剛融化，就應將細胞凍存管取出水浴。

3.在從水浴中取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑，用無(wú)菌紙巾或紗布試干。之后的操作步驟都應該遵循在無(wú)菌條件下生物安全柜中嚴格操作。

4. 小心擰開(kāi)凍存管的頂部，將管內容物用1ml移液槍轉移到含9毫升培養基的無(wú)菌離心管中。離心5到7分鐘(125×g),小心吸去上清液以去除抗凍劑(二甲基亞砜)，避免丟失細胞沉淀。將細胞沉淀重懸于配好的完全培養基中。將細胞懸液轉移到培養容器，輕輕搖晃使細胞均勻的分布。生長(cháng)較慢的細胞株可重懸于5-8ml培養基并轉移到T25培養瓶。生長(cháng)較快的細胞株可重懸于12-20ml培養基并轉移到T75培養瓶。ATCC網(wǎng)站有各個(gè)細胞株的具體生長(cháng)狀況及培養方法記載。

5. 將細胞培養容器置于細胞培養箱，在溫度37℃, 二氧化碳濃度5%的培養條件下進(jìn)行孵育。細胞培養24小時(shí)后應在顯微鏡下觀(guān)察細胞形態(tài)和生長(cháng)狀況。(請參閱:*注2)

*注1:雖然大多數細胞株可以在一種以上的培養基中生長(cháng)，但細胞的特征有可能會(huì )在更換不同種培養基時(shí)發(fā)生變化。為保證最佳效果，請從細胞培養一開(kāi)始就使用ATCC推薦指定的培養基。

*注2:某些細胞株，如雜交瘤株，可能需要幾天的時(shí)間才從凍存狀態(tài)下完全恢復正常生長(cháng)。在細胞復蘇培養第一天可能會(huì )呈現較低的細胞活力并產(chǎn)生一些細胞碎片。度過(guò)這一時(shí)期后，細胞會(huì )恢復并進(jìn)入指數增長(cháng)期。

為了確保細胞活力、遺傳基因型穩定和表型的穩定，細胞株的培養需要保持在對數期。這意味著(zhù)需要定期對細胞進(jìn)行傳代。并且注意在細胞進(jìn)入生長(cháng)平臺期之前，即單層細胞100%匯合長(cháng)滿(mǎn)前或懸浮細胞達到其推薦的最大細胞密度之前，要進(jìn)行細胞傳代。監測細胞生長(cháng)和繪制每個(gè)細胞株的生長(cháng)曲線(xiàn)都有助于確定細胞株的生長(cháng)特性。

注: 細胞培養請嚴格參考其說(shuō)明書(shū)和質(zhì)檢報告COA中信息

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