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2 Guava—病毒顆粒檢測

常規檢測病毒和/或病毒顆粒的透射電子顯微鏡、ELISA、病毒滴定等方法無(wú)法分析各類(lèi)病毒比例或區分感染性與非感染性病毒顆粒。

流式細胞儀能夠直接檢測單個(gè)病毒顆粒及其特征。Landowski等人單獨使用抗體直接檢測病毒樣顆粒(NiVLPs)，開(kāi)發(fā)出新的流式病毒學(xué)研究工具，可高通量測量病毒動(dòng)力學(xué)，研究病毒顆粒表面糖蛋白比例[ref 2]。

作者利用Guava 8HT檢測發(fā)現，相較于下圖A中PBS緩沖液，圖B中VLPS病毒FSC/SSC信號可以很好的與背景分開(kāi)。圖C-F顯示分別連接了1種、2種和3種不同病毒糖蛋白片段后VLPs在四象限門(mén)內的表達變化。

Guava的超高靈敏度確保在針對如病毒等微小顆粒的檢測中，不僅能夠對目標實(shí)現清晰分群，還可以對病毒入侵細胞的機理進(jìn)行分析研究。

3 Guava—免疫分型研究 

免疫細胞計數和分型是評估病毒感染后機體免疫反應的重要參數，流式則是必不可少的檢測手段。

武漢協(xié)和醫院的研究團隊發(fā)表在預印本平臺MedRxiv上的一篇文章描述了不同疾病嚴重程度的新冠患者外周血淋巴細胞亞群比例變化[ref 3]。分析顯示：

1. 重癥患者入院時(shí)外周血淋巴細胞的絕對計數顯著(zhù)低于輕癥患者，而白細胞和中性粒細胞的絕對計數明顯高于入院時(shí)的輕癥患者(下圖)。

2. 與輕癥患者相比，重癥患者CD3+ T細胞、CD4+和CD8+T細胞亞群計數持續下降，而B(niǎo)細胞和NK細胞計數無(wú)顯著(zhù)性差異(下圖)。

3. 進(jìn)一步評估中性粒細胞/CD8+T細胞比例(N8R)、中性粒細胞/淋巴細胞比例(NLR)、嗜中性粒細胞計數(NEC)、白細胞計數這4個(gè)變量。詳細統計分析結果顯示N8R可作為監測重癥患者的預后指標。

Tips:

Guava免疫分型多色實(shí)驗方案

1. 取10 μl 成人全血，與抗CD45，CD3，CD4，CD8，CD16，CD56，CD19，CD45 RA和CD62L抗體混合，室溫孵育20分鐘；

2. 加入180 μl 裂解液，室溫反應15 分鐘，上機檢測。

3. 圈門(mén)：

• CD45+的淋巴細胞進(jìn)一步用SSC vs. CD3圈門(mén)；

• T細胞(CD3+/CD45+)再用CD4 vs. CD8圈門(mén)；

• CD4+和CD8+的T細胞分別用CD45RA和CD62L區別原始和記憶細胞。

• CD3-細胞進(jìn)一步分為CD19+的B細胞和CD16+/CD56+的NK細胞。

如圖所示，T、B、NK各細胞亞群清晰可見(jiàn)，并可對各細胞亞群進(jìn)行絕對計數，提供準確檢測結果。

Reference：

1. Paula Ruibal et al. Nature, 533 (2016): 100–104.

2. Matthew Landowski et al. Journal of Virology, 88 (2014): 14197–14206.

3. Jing Liu et al. Longitudinal characteristics of lymphocyte responses and cytokine profiles in the peripheral blood of SARS-CoV-2 infected patients. medRxiv, doi: https://doi.org/10.1101/2020.02.16.20023671

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