血清，「蜜糖」亦或是 「砒霜」？它既提供細胞生長(cháng)的必備營(yíng)養，也會(huì )因其復雜的成分和存在病原體污染的可能性而導致細胞死亡。

因而，在神經(jīng)細胞和干細胞培養中，無(wú)血清體外培養日益成為主流。此時(shí)，應該如何選擇無(wú)血清培養基補充劑呢？

首先，一分鐘了解無(wú)血清培養基補充劑的變遷史：

1993 年 G. J. Brewer 等研究者開(kāi)發(fā)了 B27‐supplemented neurobasal™成分明確的補充劑，該補充劑在已有的無(wú)血清培養基基礎上，優(yōu)化了 20 種成分的濃度，從而延長(cháng)大鼠胚胎海馬神經(jīng)元的存活時(shí)間，后續被廣泛使用。

由于商品化的培養基補充劑在培養神經(jīng)元的能力上表現出很大的差異，2008 年 Yucui Chen 等人用 21 種不同的成分（NS21）重新優(yōu)化和修改了 B27 的配方，以更好地支持神經(jīng)元的培養，維持神經(jīng)元的形態(tài)特征、突觸的形成和突觸后反應。同時(shí)，研究中發(fā)現 B27/NS21 的質(zhì)量受牛血清白蛋白質(zhì)量的影響，NS21 使用 holo-transferrin 比使用 apo-transferrin 效果更好。

R&D Systems® 的 N21-MAX 培養基補充劑（N21-MAX Media Supplement，貨號 AR008）在傳統的 B27 和 NS21 神經(jīng)細胞培養基補充劑的基礎上進(jìn)行了改進(jìn)，不含血清且成分明確，保證神經(jīng)細胞的健康生長(cháng)，促進(jìn)神經(jīng)突延伸和突觸成熟。

在 E18 大鼠海馬神經(jīng)元無(wú)血清培養基中添加 N21-MAX Media Supplement（貨號 AR008 ），顯示突觸標記物 Synaptotagmin（抗體貨號 MAB4364 ）和 CAM Kinase II（抗體貨號 MAB5584 ）的穩定表達。

如今，越來(lái)越多的 B27 相似補充劑面世，用于優(yōu)化干細胞和 3D 細胞培養，而 N21-MAX 在調控干細胞擴增，促進(jìn)干細胞分化等方面也表現出色。每批 N21-MAX 都在原代海馬神經(jīng)元上進(jìn)行測試，以確保品質(zhì)的穩定性。

R&D Systems® 提供多款無(wú)血清培養基補充劑，主要產(chǎn)品及應用請參考：

除此之外，N-2 MAX Media Supplement 和 N21-MAX Media Supplement 也可作為多種類(lèi)器官實(shí)驗的培養基補充劑。針對不同的類(lèi)器官培養，在官網(wǎng)有配套的實(shí)驗流程及配方可供參考（https://www.rndsystems.com/cn/products/organoid-and-3d-culture-reagents），如人胃類(lèi)器官培養等：

下面我們通過(guò) 5 個(gè)小問(wèn)答，來(lái)進(jìn)一步解答有關(guān)培養基補充劑的疑問(wèn)：

1. 為什么要使用成分明確的培養基培養神經(jīng)元 ?

無(wú)血清且成分明確的培養基通常被用作含血清的標準培養基的替代品，以減少研究人員不希望看到的實(shí)驗波動(dòng)。不可控的實(shí)驗波動(dòng)通常與培養基中添加的血清所含的成分有關(guān)，如維生素、激素和生長(cháng)因子水平的不確定性。

當使用成分明確的培養基時(shí)，這些變動(dòng)因素隨之消除，病原體污染的可能性也會(huì )降低。此外，無(wú)血清培養基便于研究人員為特定實(shí)驗設計開(kāi)發(fā)特定用途的培養基。

2. N21-MAX Media Supplement (貨號AR008) 與其它神經(jīng)干細胞補充劑相比，優(yōu)勢在哪里？

我們實(shí)驗室內部進(jìn)行了對比測試，發(fā)現在長(cháng)期培養（21 天）E18 大鼠海馬神經(jīng)元時(shí)，使用 AR008 可觀(guān)察到更好的突觸相關(guān)蛋白表達，增大突觸內 puncta 的密度，促進(jìn)突起生長(cháng)（下圖）。這主要是因為 N21-MAX 培養基補充劑含有 holo-transferrin，而其他補充劑通常含有 apo-transferrin。文獻報道 holo-transferrin 是神經(jīng)細胞培養的首選。

3. N-2 Plus Media Supplement (貨號AR003) 和N-2 MAX Media Supplement (貨號 AR009)的區別是什么？

AR003 和 AR009 均可用于培養神經(jīng)元、神經(jīng)祖細胞和干細胞，它們的主要區別在于胰島素的來(lái)源。AR003 含有天然牛胰島素，而 AR009 含有重組人胰島素，其它成分完全相同。兩款產(chǎn)品經(jīng)過(guò)平行實(shí)驗驗證。

4. 除了人 Transferrin 外，N-2 MAX 培養基補充劑是否含有其它動(dòng)物源成分 ?

不。除人轉鐵蛋白外，N-2 MAX 培養基補充劑不含任何動(dòng)物源成分。GMP N-2 MAX 培養基補充劑（貨號 AR016）是一種無(wú)動(dòng)物源成分的添加劑。

5. N-2 MAX Media Supplement 和 N-2 Plus Media Supplement 是否可以解凍，分裝，再冷凍，用于更小批次的基礎培養基 ?

是的，這不會(huì )影響補充劑的穩定性。有限的凍融，分裝成小包裝使用，是可以接受的。

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