免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫細胞化學(xué)（ICC）和免疫熒光（IF），姑且稱(chēng)為定位檢測抗原表達的「三駕馬車(chē)」，是生物學(xué)研究中常用的免疫學(xué)實(shí)驗。

三種方法原理相似，易于混淆。實(shí)驗人員在挑選抗體產(chǎn)品時(shí)常常有這樣的困惑，某一種應用的抗體是否也適用于另外兩種實(shí)驗？是，也不是。具體要視不同品牌而定，下面讓我們?yōu)槟灰唤饣螅?/p>

「三駕馬車(chē)」的應用有何不同？

首先，我們一起了解下三種檢測方法的區別。IHC 應用的樣本類(lèi)型是組織，ICC 的樣本類(lèi)型是細胞，而 IF 則是采用熒光標記抗體實(shí)現組織/細胞中目的蛋白的定位。其中，IHC 更可以根據組織切片的形式分為 IHC-P（石蠟切片）及 IHC-Fr（冰凍切片）。

Bio-Techne 的抗體產(chǎn)品選擇的特別之處在于，不會(huì )顯示單獨的 IF 應用，而是與 ICC 合并為一類(lèi)：ICC/IF。因而，涉及三種檢測方法的應用標識主要分為：ICC/IF，IHC（IHC-P、IHC-Fr）。

左上，IHC：使用 HIF-1 alpha 抗體（Novus，NB100-105）在人腎臟中染色 HIF-1 alpha；右上，ICC：使用 10 µg/mL IRAK4 抗體（Novus，NBP1-77231）和 HRP 偶聯(lián)的二抗在 K562 細胞中檢測到 IRAK4 的表達。細胞用 DAB 染色（棕色），細胞核用蘇木精（藍色）復染。左下，基于組織的 IF：使用 1 μg/mL 的 GAP-43 抗體（Novus，NB300-143）及 AlexaFluor® 488 標記的二抗，檢測 E15.5 小鼠胚胎的石蠟切片中 GAP-43 的表達。DAPI 用于細胞核復染；右下，基于細胞的 IF：使用 15 µg/mL 的 IRAK4 抗體（R&D Systems，AF3919）及 NorthernLights™ 557 偶聯(lián)的二抗（紅色）在 THP 1 細胞中檢測 IRAK4。用 DAPI（藍色）對細胞核進(jìn)行染色。

如何挑選合適的 IHC/ICC/IF 抗體？

在了解三種檢測方法的差別之后，我們回到文章開(kāi)頭的問(wèn)題，一種抗體是否可以在三種檢測方法中通用？換句話(huà)說(shuō)，如何挑選適用于自身實(shí)驗的抗體呢？

Bio-Techne 旗下兩大抗體品牌 R&D Systems® 與 Novus Biologicals®，在抗體的適用范圍（IHC/ICC/IF）描述方面存在差異：

1. R&D Systems® 品牌的抗體在產(chǎn)品頁(yè)面顯示已經(jīng)驗證的種屬（Species）及應用 (Applications)，這些應用通常在說(shuō)明書(shū)中會(huì )有詳細的信息。

[特別注意] R&D Systems® 品牌抗體應用中 IHC 或者 ICC/IF 只要有一項，則可以適用于 IHC 及 ICC/IF 的應用。一般來(lái)說(shuō)，應用中包含「IHC」的抗體同時(shí)適用于 IHC-Fr 及 IHC-P，除非說(shuō)明書(shū)中另有聲明。

例如，巨噬細胞標志物 CD68（貨號 MAB20401）抗體，應用欄中僅標出了 ICC/IF，雖然不能確定一種抗體在每一種組織中都有同樣的表現，但我們可以證明其對固定抗原的識別，所以也可應用于 IHC 實(shí)驗。

溫馨提示：若說(shuō)明書(shū)中沒(méi)有 IHC 以及 ICC/IF 的應用說(shuō)明，表明我們沒(méi)有任何數據來(lái)支持相應的應用，即不能保證實(shí)驗結果。 

2. 同樣的，Novus Biologicals® 抗體產(chǎn)品頁(yè)面也顯示出所有經(jīng)過(guò)驗證的種屬（Species）及應用 (Applications)。值得一提的是，除 Novus Biologicals® 實(shí)驗室驗證的種屬及應用外，部分數據也來(lái)自于客戶(hù)的鼎力支持。

除此之外，還有些抗體包含 (-) 標志，代表驗證過(guò)為陰性的種屬或者應用，不建議您再次進(jìn)行嘗試。

[特別注意] Novus Biologicals® 的 IHC 與 ICC/IF 兩種應用不能通用，這一點(diǎn)與 R&D Systems® 的規定有所不同。此外，若有單獨標注 IHC 的子類(lèi)（IHC-Fr、IHC-P 或 IHC-Whole Mount），只驗證用于單獨標注的子類(lèi)，如果只有 IHC 標志而無(wú)子類(lèi)標志，則適用于所有的 IHC 切片類(lèi)型。即：

• 抗體 A 標注了 IHC，則可以應用于 IHC-P、IHC-Fr，未驗證 ICC/IF；
• 抗體 B 標注了 IHC，IHC-Fr，則可以應用于 IHC-Fr，未驗證 IHC-P 及 ICC/IF；
• 抗體 C 標注了 ICC/IF，則可以應用于 ICC/IF，未驗證 IHC-P 及 IHC-Fr。

以自噬標志物 LC3B（NBP2-46892）為例，應用欄中標出了 ICC/IF，IHC，IHC-P，說(shuō)明此產(chǎn)品已驗證適用于 ICC/IF 和 IHC-P，未驗證 IHC-Fr 實(shí)驗。

根據品牌的不同，可以選擇合適的官方驗證過(guò)的抗體。謹記上述小貼士，開(kāi)展實(shí)驗不用愁。

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