在 ELISA 實(shí)驗所需的簡(jiǎn)單儀器中，搖床是個(gè)迷惑的存在，科研猿們經(jīng)常在是否需要使用中舉棋不定。大多數的 ELISA 實(shí)驗是不需要使用搖床的，室溫孵育即可，但有些特殊的 ELISA 不但需要搖床，且有嚴格的使用參數。

在 R&D Systems® ELISA 試劑盒說(shuō)明書(shū)中，其實(shí)早有答案，以 Human IL-6 Quantikine HS ELISA Kit（貨號 HS600C）為例，操作流程（Assay procedure）部分中提到：

這里，建議使用 500 rpm，0.12" orbit 參數的搖床/振蕩器。

• 搖床長(cháng)什么樣？為什么需要使用搖床？

眾所周知，實(shí)驗室里通常有各種用途及規格的搖床，如用來(lái)培養細菌、動(dòng)物細胞及用于 Western Blot 抗體孵育的搖床等。

我們 ELISA 說(shuō)明書(shū)中要求的搖床類(lèi)似下圖，該搖床專(zhuān)為 96 孔板設計，軌道直徑 3 mm，轉速可達到 500±50 rpm，運行時(shí)快速振動(dòng)，且頂部托盤(pán)有微孔板固定裝置，微孔板既不會(huì )松脫，也不會(huì )有液體飛濺。

如果在 ELISA 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中要求使用搖床，則必須使用，否則會(huì )影響抗原抗體的有效結合，導致待測孔的 OD 值偏低。

例如使用 Human/Mouse/Rat Activin A Quantikine ELISA Kit（貨號 DAC00B），在未使用搖床時(shí)得到的標準品 OD 值（450 nm 的測定值減去 570 nm 的測定值）異常（表 1）。

結果顯示，最高濃度（1,000 pg/mL）的標準品平均 OD 值僅為 0.647，且 125pg/mL 標準品兩個(gè)復孔 OD 值相差較大，低濃度標準品 OD 值無(wú)明顯梯度。因而無(wú)法保證檢測結果的準確性。而在使用了搖床的實(shí)驗中，標準品 OD 值正常（表 2）。

• 是否必須使用指定參數的搖床？可以用其它規格代替嗎？

由于說(shuō)明書(shū)中指定的軌道直徑 3 mm，轉速 500±50 rpm 的搖床是我們驗證過(guò)的能保證準確結果的搖床，而其它搖床，如 Western Blot 實(shí)驗中使用的水平搖床軌道直徑較大，如果設置成 500rpm 就會(huì )轉速太快，容易造成微孔板內液體飛濺、樣品孔污染，進(jìn)而影響實(shí)驗結果的準確性。

如果您希望使用其它規格的搖床嘗試，可進(jìn)行如下操作：

將適量體積的液體加入備用 96 孔微孔板，用封口膜覆蓋孔板；

調整搖床速度，讓液體劇烈振蕩，使其幾乎旋轉到微孔板的頂部，但不能形成氣泡或飛濺到封板膜上；

使用 R&D Systems® 的試劑盒做一次標準曲線(xiàn)，驗證一下實(shí)驗結果是否可以接受。

但這種測試需要耗費額外的孔板及時(shí)間，得不償失，所以最好還是根據說(shuō)明書(shū)的建議選擇搖床。

小小的搖床，卻關(guān)乎實(shí)驗的成敗。當我們準備開(kāi)展實(shí)驗時(shí)，不妨多研讀一番說(shuō)明書(shū)，不要錯過(guò)其中的細枝末節。

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