微管具有多種細胞功能，包括在有絲分裂期間分離染色體、維持細胞形態(tài)、調控纖毛和鞭毛的擺動(dòng)以及參與細胞物質(zhì)的運輸。大量腫瘤化學(xué)療法靶向微管蛋白的組裝或拆卸過(guò)程，強調了微管與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。另外，研究表明，微管組裝或拆卸的失調與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)。

從結構上講，微管是由 α-和 β-Tubulin 異二聚體組成中空管狀結構，它們端對端連接形成原纖絲，原纖絲橫向組合構成 25 nm 的微管。與 α-和 β-Tubulin 不同的是 γ-Tubulin，其包含在微管組織中心（MTOC）中。通過(guò)與其他蛋白質(zhì)的結合，γ-Tubulin 充當 α/β-Tubulin 二聚體起始聚合的支架。

微管結構示意圖，圖片來(lái)源：biologydictionary.net

特異性示蹤微管蛋白，是解析疾病病理機制、揭秘微管蛋白功能的重要前提。

Tocris®獨家發(fā)布的新型微管探針紫杉醇 Janelia Fluor® 646（貨號 6266），可用于微管細胞骨架的直接成像。該探針僅在與微管結合時(shí)才發(fā)出熒光，因此實(shí)驗過(guò)程中無(wú)需洗脫。

• 紫杉醇是與 Tubulin 結合的二萜，可促進(jìn)并穩定 Tubulin 蛋白聚合，這是其具有抗有絲分裂和細胞毒性作用的原因。熒光染料與紫杉醇的偶聯(lián)為微管細胞骨架的成像提供了便捷的方法?；诖嗽淼臒晒馓结樣?Flutax 1（貨號 2226）和 Flutax 2（貨號 6254）。

• 新型微管探針結合了紅色熒光染料 Janelia Fluor® 646，最大激發(fā)波長(cháng)為 646 nm；最大發(fā)射波長(cháng)為 664 nm。Janelia Fluor® 系列熒光染料相較于普通熒光染料，其熒光更明亮，光穩定性更高。最突出的優(yōu)勢在于其具有細胞膜通透性，能夠進(jìn)行活細胞染色或固定細胞染色，以及細胞內的單分子示蹤。

紫杉醇 JaneliaFluor® 646 探針在 COS7 細胞上的應用：COS7 細胞用 3 µM 紫杉醇 JaneliaFluor® 646 標記，在 37 °C 下放置 1 小時(shí)。在 Leica TCS SP8 共焦激光掃描顯微鏡上成像并拍攝。

附紫杉醇 JaneliaFluor® 646 實(shí)驗方案：

1. 在 DMSO 中準備紫杉醇 JaneliaFluor® 646 的儲備溶液。儲備溶液可以等分并在 ≤ -20 °C 的環(huán)境下最多保存 1 個(gè)月；
2. 將儲備溶液稀釋到 37 °C 的溫熱培養基中，然后放入預熱的盒子中（用于存放于培養箱）。工作溶液應在同一天制備并使用；
3. 以 3 μM 的終濃度應用于活細胞檢測，也可以使用較低的濃度，并且應針對不同的實(shí)驗優(yōu)化濃度；
4. 在 37 °C 孵育 1 小時(shí)之后成像。理論上無(wú)需洗脫，若選擇洗脫方案，可在成像前用 1x PBS 和 2% 的 BSA 沖洗細胞 3 次，并加入新鮮培養基。

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