去年9月份的時(shí)候，小編推薦了Abcam的WB新手入門(mén)課程（每周一節，共分4節），不知道小伙伴們有沒(méi)有g(shù)et到WB的全套技能呢？現在，Abcam推出了實(shí)驗必備的升級技能---IHC，同樣是以每周一次課程的形式。跟著(zhù)小編學(xué)起來(lái)吧！

在第 1周的 IHC 培訓中，我們將展示如何開(kāi)啟一個(gè)良好的開(kāi)端。如何制備樣本將會(huì )成為決定最終數據質(zhì)量的重要影響因素。本次培訓中，我們將指導您完成 IHC 最佳樣本處理的主要步驟。

1、什么是免疫組化?

免疫組化（immunohistochemistry，IHC）是利用抗原-抗體相互作用顯示組織切片中抗原分布和定位的一種方法。

IHC 常用于診斷癌癥等疾病中的異常細胞和組織?？傮w而言，IHC 提供了有價(jià)值的觀(guān)點(diǎn)和支持，使其他方法獲得的數據更加有據可依。

IHC 染色依賴(lài)于識別靶蛋白的抗體，可以通過(guò)兩種檢測方法對抗原-抗體的相互作用進(jìn)行可視化，一種是顯色方法（酶偶聯(lián)抗體催化底物顯色，產(chǎn)生有色沉淀）；另一種是熒光檢測法（熒光基團偶聯(lián)抗體產(chǎn)生熒光）。

2、標本形式

IHC組織保存的兩種主要方法是石蠟包埋和組織冰凍（總結如下）：

3、固定

固定可防止離體組織自溶和壞死，保留抗原特性，提高組織成分的折射率，同時(shí)有助于保護樣本處理過(guò)程中的細胞成分。靶抗原和所需的檢測技術(shù)都會(huì )影響固定劑的選擇，如下圖所示。

圖 1：固定劑對免疫染色效果的影響。和甲醛固定（左）相比，用甲醇固定的 HeLa 細胞（右）中更易檢出組蛋白 H2B K5 巴豆?；庖呓M化結果。一抗：ab177139，組蛋白 H2B（K5巴豆?；┑耐枚嗫寺】贵w，1 μg/mL。二抗：ab150081，山羊抗兔 IgG H&L (Alexa Fluor® 488)，0.5 μg/mL。DAPI 染核, ab7291 搭配ab150120 染微管蛋白（紅色）。

以下是我們關(guān)于固定劑選擇的建議：

· 大多數低分子量的蛋白質(zhì)、多肽和酶：對于細胞/細胞學(xué)樣本制備，使用 4% 甲醛；對于組織切片，使用 10% 中性福爾馬林緩沖（NBF）液；

·  柔軟精細組織：Bouin 固定液；

·  氨基酸等小分子：4% 甲醛；

·  造血器官（如肝、脾、骨髓）：Zenker 固定液；

·  結締組織：Helly 固定液；

·  核酸：Carnoy 固定液；

·  大分子蛋白抗原（如免疫球蛋白）：冰浴丙酮或甲醇（100%）；

·  細胞核形態(tài)：福爾馬林-硫酸鋅溶液；

·  電鏡成像：4% 甲醛，1% 戊二醛溶液。

4、包埋和切片

固定組織后需立即處理，以充分保證組織被切成厚度為 4-5 μm 。組織經(jīng)脫水、透明化，然后浸蠟，以進(jìn)行切片。本方案包括

·   石蠟組織處理

·   冰凍組織包埋

·   乙二醇甲基丙烯酸酯 (Glycol methacrylate, GMA) 包埋

小結

希望您現在已經(jīng)具備良好的前期基礎，可以開(kāi)始計劃您的 IHC 實(shí)驗。您應該對樣本制備有更多了解，尤其是：IHC 樣本保存的兩種主要方法，以及組織固定和包埋方法。

下周我們將介紹免疫組化染色原理以及抗原修復、通透化和封閉。

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