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用各種各樣的抗體做生物學(xué)實(shí)驗的小伙伴們，經(jīng)常會(huì )碰到實(shí)驗結果中背景較高的問(wèn)題，常常會(huì )使結果圖片不夠清晰和美觀(guān)。想要降低實(shí)驗背景，聽(tīng)聽(tīng)來(lái)自劍橋大學(xué)研究員的推薦。

將非特異性結合和高背景染色降至最低。

“了不起的二抗。特異性高，信號強。高度稀釋后依然有足夠的靈敏度。我向大家推薦這種抗體。” ——英國劍橋大學(xué)的研究員

什么是預吸附？

預吸附（也稱(chēng)交叉吸附）是一種附加的純化步驟，用于提高抗體的特異性。包含二抗的溶液會(huì )流經(jīng)一個(gè)基質(zhì)柱，基質(zhì)柱中包含了從潛在交叉反應的物種中獲取的固定血清蛋白。非特異性二抗將保留在柱中，而特異性高的二抗將通過(guò)。

預吸附（交叉吸附）二抗的優(yōu)勢

在處理組織和細胞時(shí)我們始終建議大家使用預吸附（交叉吸附）二抗，降低非特異性背景。除了上述目的，這些抗體還在以下方面尤為有用：

•多色實(shí)驗：當同時(shí)使用多個(gè)一抗及其對應的二抗時(shí)，應使用產(chǎn)生其他一抗的物種預先吸附某種二抗，以降低二抗和其他一抗之間發(fā)生交叉反應的風(fēng)險。

舉例：利用在兔和小鼠中分別產(chǎn)生的一抗做雙染色實(shí)驗時(shí)，請使用已用小鼠血清預吸附的抗兔 Alexa Fluor® 488二抗，和已用兔血清預吸附的抗小鼠 Alexa Fluor® 647二抗。

•對含有大量?jì)仍葱悦庖咔虻鞍?Igs) 的樣本進(jìn)行 IHC 實(shí)驗：二抗應使用與樣本源物種同樣的物種進(jìn)行預吸附，以減少二抗和免疫球蛋白交叉反應的風(fēng)險。

舉例：對人體組織和細胞系進(jìn)行染色時(shí)，使用已用人體血清預吸附的抗小鼠 HRP二抗。

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