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同靶標的抗體有好多,如何眾里挑一?
小編經(jīng)常收到客戶(hù)的咨詢(xún),同一靶標為什么會(huì )有很多種抗體?不同貨號的抗體為什么抗體形式不一樣?使用上到底有什么區別?現在,小編將經(jīng)驗分享給大家,說(shuō)明一下目前市售抗體不同的抗體形式。以后,您再選擇抗體的時(shí)候,妥妥的??!!
市售抗體按照是否經(jīng)過(guò)純化可以分為未純化抗體和純化抗體兩大類(lèi)。
01、未純化抗體
1)抗血清
抗血清是指已經(jīng)除去了凝血蛋白和血紅細胞的免疫宿主的血液??寡灏蟹N類(lèi)的抗體/免疫球蛋白以及其它血清蛋白。它所包含的不僅有識別靶抗原的抗體,還有識別非靶抗原的抗體,在免疫分析中有時(shí)會(huì )發(fā)生非特異性反應。由于這個(gè)原因,小編建議您選擇抗體時(shí)盡量避免選擇這種類(lèi)型的抗體。
2)組織培養上清
單克隆抗體可以通過(guò)雜交瘤細胞培養(細胞分泌性抗體)并收獲雜交瘤組織培養上清來(lái)獲得。該類(lèi)型的抗體濃度一般不太高,導致具體實(shí)驗的時(shí)候稀釋度較低。
3)腹水
單克隆抗體可以通過(guò)在小鼠(或大鼠)的腹腔中生長(cháng)雜交瘤細胞而產(chǎn)生。雜交瘤細胞注射入小鼠以后,就會(huì )在小鼠腹腔繁殖并產(chǎn)生液體(腹水)。這種腹水就包含了高濃度的可收獲抗體,比雜交瘤細胞培養有更高的抗體產(chǎn)量。
02、純化抗體
1)蛋白A/G純化
蛋白 A/G 純化是應用金黃色葡萄球菌的蛋白 A 或鏈球菌的蛋白G對免疫球蛋白 Fc 段的高親和性進(jìn)行純化。蛋白 A/G 純化從粗制抗血清中去除了血清蛋白,但沒(méi)有去除非特異的抗體。因此,經(jīng)過(guò)蛋白 A/G 純化的抗體仍然具有一小部分不期待的交叉反應性。
2)親和純化
親和純化就是將免疫原偶聯(lián)于層析填料上,利用層析原理進(jìn)行純化。 抗原親和純化的優(yōu)勢是免疫球蛋白能夠特異性地同刺激它產(chǎn)生的抗原進(jìn)行結合,結果消除了大量的非特異抗體,將能特異與靶抗原相結合的抗體富集。因此親和純化后獲得的主要是含所期待的特異性抗體。
3)預吸附
這種抗體形式常見(jiàn)于二抗。它們被不同物種來(lái)源的抗體或血清吸附,以消除與其他物種一抗可能的交叉反應。這樣純化后的抗體純度和特異性提高,交叉反應被顯著(zhù)減少。
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