一. 流式細胞術(shù)概述

流式細胞術(shù)(Flow Cytometry, FCM)是七十年代發(fā)展起來(lái)的高科學(xué)技術(shù),它集計算機技術(shù)、激光技術(shù)、流體力學(xué)、細胞化學(xué)、細胞免疫學(xué)于一體, 同時(shí)具有分析和分選細胞功能。它不僅可測量細胞大小、內部顆粒的性狀,還可檢測細胞表面和細胞漿抗原、細胞內DNA、RNA含量等,可對群體細胞在單細胞水平上進(jìn)行分析, 在短時(shí)間內檢測分析大量細胞,并收集、儲存和處理數據,進(jìn)行多參數定量分析; 能夠分類(lèi)收集(分選)某一亞群細胞,分選純度＞95%。在血液學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、藥物學(xué)、分子生物學(xué)等學(xué)科廣泛應用。

國內使用的流式細胞儀主要由美國的兩個(gè)廠(chǎng)家生產(chǎn):BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(簡(jiǎn)稱(chēng)B-D公司)。流式細胞儀主要有兩型:臨床型（又稱(chēng)小型機、臺式機）和綜合型（又稱(chēng)大型機、分析型）。BECKMAN-COULTER公司最新產(chǎn)品為EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL, B-D公司最新產(chǎn)品為FACS Vantage和FACS Calibur。EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是臨床型;EPICS ALTRA和 FACS Vantage是綜合型，除具備檢測分析功能外,還具有細胞分選功能,多用于科學(xué)研究。

二.流式細胞儀主要技術(shù)指標

1．流式細胞儀的分析速度：一般流式細胞儀每秒檢測1000～ 5000個(gè)細胞,大型機可達每秒上萬(wàn)個(gè)細胞。

2．流式細胞儀的熒光檢測靈敏度：一般能測出單個(gè)細胞上<600個(gè)熒光分子,兩個(gè)細胞間的熒光差＞5%即可區分。

3．前向角散射（FSC）光檢測靈敏度：前向角散射（FSC）反映被測細胞的大小,一般流式細胞儀能夠測量到0.2μm～０.5μm。

4．流式細胞儀的分辨率：通常用變異系數CV值來(lái)表示，,一般流式細胞儀能夠達到<2.0%,這也是測量標本前用熒光微球調整儀器時(shí)要求必須達到的。

5．流式細胞儀的分選速度：一般流式細胞儀分選速度＞1000個(gè)/秒，分選細胞純度可達99%以上。

三.流式細胞儀主要構造和工作原理    流動(dòng)室及液流驅動(dòng)系統

流式細胞儀主要由以下五部分構成:①流動(dòng)室及液流驅動(dòng)系統②激光光源及光束形成系統③光學(xué)系統④信號檢測與存儲、顯示、分析系統⑤細胞分選系統。
流動(dòng)室（Flow Cell或Flow Chamber）是流式細胞儀的核心部件，流動(dòng)室由石英玻璃制成，單細胞懸液在細胞流動(dòng)室里被鞘流液包繞通過(guò)流動(dòng)室內的一定孔徑的孔,檢測區在該孔的中心，細胞在此與激光垂直相交，在鞘流液約束下細胞成單行排列依次通過(guò)激光檢測區。流動(dòng)室里的鞘液流是一種穩定流動(dòng)，控制鞘液流的裝置是在流體力學(xué)理論的指導下由一系列壓力系統、壓力感受器組成，只要調整好鞘液壓力和標本管壓力, 鞘液流包繞樣品流并使樣品流保持在液流的軸線(xiàn)方向，能夠保證每個(gè)細胞通過(guò)激光照射區的時(shí)間相等，從而使激光激發(fā)的熒光信息準確無(wú)誤。見(jiàn)圖12.1流動(dòng)室示意圖。流動(dòng)室孔徑有60μm、100μm、150μm 、250μm等多種，供研究者選擇。小型儀器一般固定裝置了一定孔徑的流動(dòng)室。

四. 流式細胞儀主要構造和工作原理    激光光源及光束形成系統

流式細胞儀可配備一根或多根激光管，常用的激光管是氬離子氣體激光管，它的發(fā)射光波長(cháng)488ηm,此外可配備氦氖離子氣體激光管（波長(cháng)633ηm）和/或紫外激光管。

流式細胞儀的主要測定信號熒光是由激發(fā)光激發(fā)的，熒光信號的強弱與激發(fā)光的強度和照射時(shí)間相關(guān)，激光是一種相干光源,它能提供單波長(cháng)、高強度、高穩定性的光照，正是能達到這一要求的理想的激發(fā)光光源。

在激光光源和流動(dòng)室之間有兩個(gè)圓柱形透鏡，將激光光源發(fā)出的橫截面為圓形的激光光束聚焦成橫截面較小的橢圓形激光光束(22μm×66μm)，在這種橢圓形激光光斑內激光能量成正態(tài)分布，使通過(guò)激光檢測區的細胞受照強度一致。

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