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hTERT介導的永生化原代細胞
眾所周知,原代細胞最真實(shí)地反映特定細胞在體內的生理狀態(tài)。然而,它們一般傳不了幾代就會(huì )停止增殖并死亡。對于一些需要大量細胞進(jìn)行的實(shí)驗比如生化分析,遺傳篩選等,無(wú)法使用原代細胞。這阻礙了原代細胞在實(shí)驗室的應用。另外,一些稀有疾病獲得的血液或者組織樣本比較少,導致獲得的細胞數目比較有限。限制了后續實(shí)驗的正常進(jìn)行。而對于可以無(wú)限傳代的細胞系,雖然沒(méi)有衰老的問(wèn)題,但它們通常包含許多遺傳突變,表現出不穩定的核型,蛋白質(zhì)表達模式也與細胞類(lèi)型不相稱(chēng)。
問(wèn)題來(lái)了, 是否有一種辦法可以使原代細胞獲得永生化的同時(shí)維持正常細胞的生理特性呢?
引起細胞永生化的因素很多,其中端粒酶在這一過(guò)程中發(fā)揮重要作用。端粒是真核細胞染色體末端的一種特殊結構。由端粒DNA和端粒蛋白質(zhì)組成。正常動(dòng)物細胞DNA的端粒隨著(zhù)細胞分裂而縮短,當縮短到一定長(cháng)度時(shí)細胞將停止增殖并死亡。
將原代細胞轉染端粒酶逆轉錄酶cDNA(human telomerase reverse transcriptase, hTERT),可以激活端粒酶活性,維持端粒長(cháng)度,阻止染色體端粒降解,誘導細胞永生化。
有研究表明,hTERT介導的永生化細胞可保持正常細胞的生理特性。通過(guò)對多種hTERT永生化細胞系研究確認,這些細胞仍然具有相應的表型和穩定的核型。而使用原癌基因導致細胞永生化的,細胞往往會(huì )發(fā)生核型變化,特別是當細胞被多次傳代以后。
通過(guò)hTERT介導的永生化細胞可以觀(guān)察到以下特性:
1、正常細胞周期控制;
2、接觸抑制;
3、錨定依賴(lài);
4、保留對血清和有絲分裂原的正常生長(cháng)反應;
5、需要生長(cháng)因子進(jìn)行增殖;
6、具有正常核型;
7、沒(méi)有與轉化相關(guān)的變化,如致瘤性,可以在軟瓊脂上生長(cháng)。
hTERT介導的永生化細胞系結合了原代細胞的生理屬性和細胞系的長(cháng)期培養特性,同時(shí)避免前者的衰老和后者的不穩定核型。此外,在許多研究中,hTERT介導永生化細胞可以誘導分化為不同的細胞,這些分化后的細胞具有特定組織特性并表達分化細胞特異性蛋白,并可以形成在只有在體內才能形成的某型結構。
ATCC人端粒酶逆轉錄酶(hTERT)永生化細胞系代表了細胞生物學(xué)研究的一個(gè)重大突破,聯(lián)合了原代細胞的生化屬性以及傳統細胞系長(cháng)期培養的特性。
•即使在高代次,也能夠維持細胞在體內的生物學(xué)特性;
•生命周期是原代細胞的5倍;
• 基本維持二倍體核型;
• 與原代細胞比較,基因表達基本不發(fā)生變化;
•沒(méi)有批間差;
• 減少實(shí)驗結果的不一致性。
ATCC擁有目前世界上最大的、品種最豐富的細胞系、微生物、以及重組DNA原料,是科研工作者公認的提供世界級的可靠的研究材料的供應商,ATCC一如既往為全世界的科學(xué)家提供最可靠的生物資源,為實(shí)驗結果的真實(shí)性和可靠性保駕護航。